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產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于人類或臨床診斷
商品屬性：

產(chǎn)品英文名稱：CFDA SE Cell Proliferation and Cell Tracking Kit

產(chǎn)品中文名稱：CFDA SE 細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒

規(guī)格：200T×5/200T×10

貨號：EY-01X8526
用途：僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

特點(diǎn)&優(yōu)勢:

•  CFDA SE探針可以在幾代中很好地保留在活細(xì)胞中。

•  探針會轉(zhuǎn)移到子細(xì)胞，但不轉(zhuǎn)移到群體中的相鄰細(xì)胞。

•  兼容流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡等檢測方法

• 實(shí)驗(yàn)開始前，確保所有的組分及設(shè)備處于合適的溫度。

保存建議:收到貨后，請避光保存于-20℃。請參閱說明書中各個(gè)組件的存儲條件，自發(fā)貨之日起，按照推薦的保存條件，有效期為12個(gè)月。

運(yùn)輸條件:藍(lán)冰運(yùn)輸

背景

5(6)-CFDA, SE 是一種可對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞示蹤染料，不僅可用于細(xì)胞增殖的體外實(shí)驗(yàn)，還可用于追蹤細(xì)胞在體內(nèi)的分裂增殖過程。5(6)-CFDA, SE 是二乙酸熒光素（Fluorescein diacetate，FDA）的衍生物，具有細(xì)胞膜滲透性，本身不具有熒光發(fā)光性。當(dāng)通過被動運(yùn)輸穿透細(xì)胞膜進(jìn)入活細(xì)胞后，被胞漿內(nèi)的酯酶催化生成羧基熒光素琥珀酰亞胺（carboxyfluoresceinsuccinimidyl ester，CFSE），可發(fā)強(qiáng)烈的綠色熒光，不能穿透細(xì)胞膜，能完好的保留在胞內(nèi)。CFSE 還可自發(fā)并不可逆地與細(xì)胞內(nèi)的氨基結(jié)合從而偶聯(lián)到細(xì)胞蛋白質(zhì)上，同時(shí)過量且未被偶聯(lián)的 5(6)-CFDA, SE 通過被動擴(kuò)散回到細(xì)胞外培養(yǎng)基內(nèi)，被后續(xù)清洗步驟所清除。經(jīng) 5(6)-CFDA, SE 標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)月，因此非常適用于細(xì)胞群落分析。5(6)-CFDA, SE 標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細(xì)胞示蹤熒光探針如 PKH26，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也很均一。在細(xì)胞分裂增殖過程中，CFSE 標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過流式細(xì)胞儀（FL1 通道）根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測出未分裂細(xì)胞，分裂一次（1/2 的熒光強(qiáng)度），二次（1/4 的熒光強(qiáng)度），三次（1/8 的熒光強(qiáng)度），以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。5(6)-CFDA, SE 可檢測分裂次數(shù)多達(dá)八次甚至更多。

本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn):

 1.操作簡便、快捷?？芍苯蛹尤氲綑z測平板。在96-孔板中檢測時(shí),無需洗滌或收獲細(xì)胞,免去溶解步驟。

2. 無放射性。不需要配制液閃混合物,也不需要處理廢棄物。

3. 與MTT相比,使用更安全。不需要使用揮發(fā)性的有機(jī)溶劑來溶解甲臜產(chǎn)物。

4. 操作靈活,與MTT不同,平板讀數(shù)后可放回溫箱繼續(xù)孵育,使顏色進(jìn)一步生成。
公司正在出售的產(chǎn)品：

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

小鼠仙臺病毒(Sendai)檢測試劑盒 96T/48T

Rat bone morphogenetic protein 4 (BMP-4) ELISA Kit 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)檢測試劑盒

Humanproteinase-aineuophilcytoplasmicaibody,PR3-ANCAELISAKit 人蛋白酶3特異性抗中性粒細(xì)胞胞質(zhì)抗體(PR3-ANCA)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Chickenheparansulfate,HS檢測試劑盒雞類肝素(HS)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞CDK4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次

MouseHeatShockProtein70,Hsp-70ELISAKit小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠血管緊張素 I (mouse ANG I)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 Phoenix

小鼠血管緊張素 II (mouse ANG II)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 Phoenix

mouse CD 40L ELISA Kit   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   奧地利 Bender

大鼠 C 反應(yīng)蛋白 (rat CRP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   美國 ADI

豬組織因子(TF)ELISA 試劑盒

Peroxisome proliferator activated receptor alpha (PPAR- alpha) ELISA Kit 人過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)檢測試劑盒

Rabbitalpha-granularmembraneprotein,GMP-140ELISAKit 兔血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)檢測試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforApo-H(HumanApolipoproteinH)ELISAKit人載脂蛋白H

溴脫氧尿核苷(BrdU)溶液(100毫摩爾)1毫升

Porcinemyelinbasicprotein,MBPELISAKit豬髓0脂堿性蛋白(MBP)檢測試劑盒規(guī)格：96T/48T

CFDA SE 細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒CCL2重組小鼠 CCL2 / MCP-1 / MCP1 蛋白 Protein

1α(MEP1α)重組蛋白 Recombinant Meprin A Alpha (MEP1a)

RIOK1重組人 RIOK1 / RIO kinase 1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein

CDC37 Protein Human 重組人 CDC37 / CDC37A 蛋白 (GST 標(biāo)簽)

IgG Protein Rabbit 重組兔 IgG-Fc 蛋白 (185 Thr/Ala, Asn 284/Ser)

操作步驟：

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設(shè)計(jì)一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點(diǎn)),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細(xì)胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA第一鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進(jìn)行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。

(二)構(gòu)建重組表達(dá)載體

1、載體酶切:將表達(dá)質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點(diǎn))進(jìn)行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達(dá)質(zhì)粒的表達(dá)菌種

1、 將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標(biāo)志(抗Amp或藍(lán)白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗(yàn)證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進(jìn)入下步操作。否則應(yīng)篩選更多克隆,重復(fù)亞克隆或亞克隆至不同酶切位點(diǎn)。

3、 以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達(dá)宿主菌的感受態(tài)細(xì)胞。

(四)誘導(dǎo)表達(dá)

1、挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養(yǎng)基的300ml培養(yǎng)瓶中, 37℃震蕩培養(yǎng)至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導(dǎo)的對照組,余下的加入IPTG誘導(dǎo)劑至終濃度0.4mM作為實(shí)驗(yàn)組,兩組繼續(xù)37℃震蕩培養(yǎng)3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。