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胎盤泌乳素Elisa試劑盒的操作步驟
點擊次數(shù):790 更新時間:2016-07-25
    胎盤泌乳素Elisa試劑盒是基于經(jīng)典酶聯(lián)夾心技術(shù)原理,只能用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。樣品和標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測因子呈正相關(guān)。
    1.確定本次檢測所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
    2.將倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。
    3.酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng)90分鐘。
    4.反應(yīng)后用自動洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
    5.將準(zhǔn)備好的抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
    6.0.01MTBS或0.01MPBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。
    7.將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
    8.0.01MTBS或0.01MPBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。
    9.按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,37℃避光反應(yīng),反應(yīng)過程中,要經(jīng)常的觀察,當(dāng)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔差別不明顯時,即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應(yīng)zui長不要超過30分鐘)。
    10.用酶標(biāo)儀在450nm測定O.D.值。
    11.根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,其實際濃度應(yīng)該×N。  上一篇 紫外線消毒器優(yōu)勢和原理 下一篇 如何選擇合適的定量PCR儀

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